М И Н И СТ Е РСТ В О О Б РА ЗО В А Н И Я РО ССИ Й СК О Й Ф Е Д Е РА Ц И И В О РО Н Е Ж СК И Й ГО СУ Д А РСТ В Е Н Н ЫЙ У...
90 downloads
228 Views
756KB Size
Report
This content was uploaded by our users and we assume good faith they have the permission to share this book. If you own the copyright to this book and it is wrongfully on our website, we offer a simple DMCA procedure to remove your content from our site. Start by pressing the button below!
Report copyright / DMCA form
М И Н И СТ Е РСТ В О О Б РА ЗО В А Н И Я РО ССИ Й СК О Й Ф Е Д Е РА Ц И И В О РО Н Е Ж СК И Й ГО СУ Д А РСТ В Е Н Н ЫЙ У Н И В Е РСИ Т Е Т
И спользов ание колорим етриии фотоколорим етриив анализе лекарств енныхсредств
П ракт и ч ес ко е руко во дс т во для с т удент о в С пец и аль но с т ь 040500 «Ф армац и я»
ВОРОН ЕЖ 2003
2
УДК661. 12 : 616–073. 524
Ут верждено науч но –мет о ди ч ес ки м с о вет о м фармац евт и ч ес ко го факуль т ет а (15 января 2003 гпро т о ко л № 1)
С о с т ави т ель Н ес т еро ва Т. А.
П ро грамма по дго т о влена на кафедре фармац евт и ч ес ко й хи ми и
и
фармац евт и ч ес ко йт ехно ло ги и фармац евт и ч ес ко го факуль т ет а Во ро нежс ко го го с ударс т венно го уни верс и т ет а. Реко мендует с я для с т удент о в 4, 5 курс а.
3
Оглавлени е Введени е… … .… … … … … … … .… … … … … … … … … … … ................... … … ....… … 4 1. Ц ель з анят и я… … … … … .… … … … … … … … … … … … … … … … … … … ..............4 2. Ко нт ро ль ны е во про с ы ............................................................ … … … … … … … … ...6 3. И нфо рмац и о нны йбло к.................................................................. … … .....… … ......7 3.1. Общ и е по ло жени я мет о да фо т о мет ри и .............................................. … … … … ..7 3.2. Задани я для с амо по дго т о вки ............................................. … … … … … … … … ...13 4. П лан з анят и я......................................................................... … … … … … … … … … .13 5. С пи с о ки с по ль з о ванно йли т ерат уры .......................................... … … .… … … … ....14 6. С амо с т о ят ель ная рабо т а ............................................................. … … ..… … … … ...16 6.1. П о дго т о вка реферат о в по т еме элект и вно го курс а (курс о во й рабо т ы )… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … .… ....… … … ......… … … 16 6.2. Вы бо р о пт и маль ны хус ло ви йи раз рабо т ка мет о ди ки фо т о мет ри ч ес ко го о пределени я препарат а .… … … … … … … … … … … … … … .… … … … … .....… … … .16 6.3. И с по ль з о вани е фо т о ко ло ри мет ри ч ес ко го мет о да в анали з е го т о вы х лекарс т венны хфо рм ................................… … … … … … … … .… … .................… … ..18 6.4. И с по ль з о вани е фо т о ко ло ри мет ри ч ес ко го мет о да для о пределени я ч и с т о т ы препарат о в ......................................................................… … … … … … … … … … .… ..18 6.5. М ет о д ви з уаль но йко ло ри мет ри и в анали з е лекарс т венны хфо рм и нди ви дуаль но го и з го т о влени я .................................… … … … .… ........................… 18 6.6. И с по ль з о вани е с о ч ет ани я фо т о ко ло ри мет ри ч ес ко го и т и т ри мет ри ч ес ки х мет о до в в анали з е мно го ко мпо нент ны х лекарс т венны хфо рм................................19 6.7. И с по ль з о вани е экс т ракц и о нно йфо т о мет ри и в анали з е лекарс т венны хфо рм ......................................................................................20 6.8. И с по ль з о вани е фо т о ко ло ри мет ри ч ес ко го мет о да для анали з а лекарс т венно го рас т и т ель но го с ы рь я ..................................… … … … … … … … … … … … … … … … ..22 7.Ф о рма о т ч ет но с т и с т удент о в и о фо рмлени е про т о ко ла....… … … … … … … … ...22 8.Задани я для вы яс нени я ус пеш но с т и ус во ени я уч ебно го мат ери ала (т ес т ы )...… 23 9. П ри ло жени я… … … … … … … … … … … … … … … … … … … ...… … … … … … … … 25 9.1. М ет о ди ки анали з а (1 – 9)… … … … … … … … … … … ...… … … … … … … … … ...25 9.2. Ф о т о ко ло ри мет р, ус т ро йс т во , т ехни ка вы по лнени я и з мерени й… … ...… … … 35 10. От вет ы кт ес т ам… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … ...… … … ...42
4
Введени е В с о временно м фармац евт и ч ес ко м анали з е для ко нт ро ля лекарс т венны х вещ ес т в нахо ди т при менени е фо т о ко ло ри мет ри ч ес ки ймет о д. Вы с о кая и з би рат ель но с т ь мет о да делает его нез амени мы м при анали з е мно го ко мпо нент ны х лекарс т венны х фо рм, о с о бенно с о держащ и х малы е до з ы с и ль но дейс т вую щ и х лекарс т венны х вещ ес т в, ко гда при менени е хи ми ч ес ки х мет о до в о каз ы вает с я нево з мо жны м. С о ч ет ани е его с о бъемны ми мет о дами по з во ляет рас ш и ри т ь во з мо жно с т и фармац евт и ч ес ко го анали з а. Ф о т о ко ло ри мет ри ч ес ки й мет о д нахо ди т
ш и ро ко е и с по ль з о вани е для
анали з а лекарс т венны х вещ ес т в в би о ло ги ч ес ки х жи дко с т ях (мо ч е, кро ви и др.), а т акже в хи ми ко -т о кс и ко ло ги ч ес ко м анали з е. Вы с о кая ч увс т ви т ель но с т ь
мет о да дает
во з мо жно с т ь
о пределят ь
с о держани е би о ло ги ч ес ки акт и вны х с о еди нени й, при меняемы х в малы х до з ах (0,001 - 0,000001г). М ет о д экс т ракц и о нно йфо т о мет ри и по з во ляет о с ущ ес т влят ь раз делени е и ко нц ент ри ро вани е анали з и руемо го вещ ес т ва, по эт о му ч ас т о и с по ль з ует с я для о пределени я лекарс т венны хвещ ес т в в рас т и т ель но м с ы рь е, нас т о йках, экс т ракт ах, маз ях с малы м с о держани ем дейс т вую щ и х вещ ес т в. В с вяз и с эт и м для улуч ш ени я про фес с и о наль но йпо дго т о вки будущ и х с пец и али с т о в т ема "И с по ль з о вани е фо т о ко ло ри мет ри и в анали з е лекарс т венны х с редс т в" вклю ч ена в элект и вны йкурс о буч ени я с т удент о в по фармац евт и ч ес ко му анали з у на 5 курс е. 1. Ц Е ЛЬ ЗА Н Я Т И Я 1.1.
Ц елев ыезадач и:
- углублени е т ео рет и ч ес ки х з нани й в о блас т и фо т о мет ри ч ес ко го
5
анали з а; - фо рми ро вани е умени й вы по лнени я с амо с т о ят ель но й рабо т ы
по
анали з у лекарс т венны хвещ ес т в фо т о ко ло ри мет ри ч ес ки м мет о до м; - о владени е элемент ами науч но -и с с ледо ват ель с ко йрабо т ы . 1.2.
Знать:
• т ео рет и ч ес ки е о с но вы фо т о мет ри и ; • с хо дс т во и о т ли ч и е с пект ро фо т о мет ри и и фо т о ко ло ри мет ри и ; • о пределени е по нят и я анали т и ч ес ко йдли ны во лны ; • мат емат и ч ес ко е вы ражени е з ако на Б угера-Л амберт а-Б ера; • при ч и ны о т кло нени йо т о с но вно го з ако на с вет о по гло щ ени я; • о пределени е по нят и я градуи ро во ч но го графи ка; • о пределени е удель но го и мо лярно го по каз ат елейпо гло щ ени я; • о пределени е по нят и я Го с ударс т венны х с т андарт ны х о браз ц о в (ГС О) и рабо ч и х с т андарт ны х о браз ц о в (РС О); • при нц и п дейс т ви я и ус т ро йс т во фо т о ко ло ри мет ра; • о с но вы экс т ракц и о нно йфо т о мет ри и . 1.3.
У м еть:
• о бо с но ват ь ,
и с хо дя
из
хи ми ч ес ки х
с во йс т в
препарат а,
во з мо жно с т ь и с по ль з о вани я фо т о ко ло ри мет ри ч ес ко го мет о да анали з а; • рабо т ат ь на фо т о ко ло ри мет ре, по дго т о ви т ь про бу для анали з а; • вы брат ь
о пт и маль ны е
ус ло ви я
фо т о ко ло ри мет ри ч ес ко го
ко ли ч ес т венно го о пределени я препарат а (реакт и в, анали т и ч ес кую дли ну во лны , ко нц ент рац и ю рас т во ра и с с ледуемо го лекарс т венно го вещ ес т ва, рас т во ри т ель , рас т во р с равнени я); • по с т ро и т ь градуи ро во ч ны йграфи к; • делат ь вы во д о по дч и нени и о пт и ч ес ко й пло т но с т и о с но вно му
6
з ако ну с вет о по гло щ ени я; • рас с ч и т ат ь удель ны йи мо лярны йпо каз ат ели с вет о по гло щ ени я; • про во ди т ь с т ат и с т и ч ес кую о брабо т ку по луч енны хрез уль т ат о в; • рас с ч и т ы ват ь ч увс т ви т ель но с т ь мет о да; • рас с ч и т ы ват ь вещ ес т ва,
и с по ль з уя
ко ли ч ес т венно е
с о держани е
градуи ро во ч ны й графи к,
лекарс т венно го
рас т во р
рабо ч его
с т андарт но го о браз ц а (РС О) и удель ны йпо каз ат ель с вет о по глащ ени я; • про во ди т ь с равнени е рез уль т ат о в ко ли ч ес т венно го о пределени я по Н Д с т ребо вани ями Гф XI и з дани я; • делат ь вы во д о кач ес т ве анали з и руемы хвещ ес т в. 2. К О Н Т РО ЛЬ Н ЫЕ В О П РО СЫ 1. Н а како м фи з и ч ес ко м с во йс т ве вещ ес т в о с но ван фо т о мет ри ч ес ки ймет о д анали з а? 2. Каки е о блас т и о пт и ч ес ко го с пект ра о т но с ят с я к уль т рафи о лет о во й, ви ди мо й, и нфракрас но йо блас т и ? 3. В како й о блас т и
о пт и ч ес ко го
с пект ра про во дят с я и з мерени я в
фо т о ко ло ри мет ри ч ес ко м мет о де? 4. Как вы би рает с я анали т и ч ес кая дли на во лны , при ко т о ро й про во дят с я и з мерени я о пт и ч ес ко й пло т но с т и в ко ли ч ес т венно м фо т о ко ло ри мет ри ч ес ко м анали з е? 5. Вч ем с хо дс т во и в ч ем о т ли ч и е фо т о ко ло ри мет ри и и с пект рафо т о мет ри и ? 6. Для како йц ели с лужат с вет о фи ль т ры в фо т о ко ло ри мет рах? 7. Како в при нц и п ус т ро йс т ва фо т о ко ло ри мет ра? 8. Опи ш и т е прави ла рабо т ы на фо т о ко ло ри мет ре? 9. Ч т о т ако е о пт и ч ес кая пло т но с т ь ? 10. Каки е о пт и ч ес ки е ко нс т ант ы и с по ль з ую т для и дент и фи кац и и вещ ес т в? 11. Зави с и т
ли
о пт и ч ес кая пло т но с т ь
от
ко нц ент рац и и
и
т о лщ и ны
7
по гло щ аю щ его с ло я? 12. Дайт е о пределени е по нят и я: удель ны й и мо лярны й ко эффи ц и ент ы с вет о по гло щ ени я? Ф о рмулы рас ч ет а. 13. Каки з уч и т ь и по с т ро и т ь с пект р? Каквы брат ь с вет о фи ль т р? 14. П ри веди т е графи ч ес ко е и мат емат и ч ес ко е вы ражени е з ако на Б угераЛ амберт а-Б ера. 15. Вч ем с ут ь мет о ди ки по с т ро ени я градуи ро во ч но го графи ка? 16. Каки е при ч и ны мо гут вы з ват ь о т кло нени я о т з ако на Б угера-Л амберт аБ ера? 17. Каки е с по с о бы рас ч ет а ко ли ч ес т венно го с о держани я вещ ес т в и з вес т ны ? 18. Ч т о т ако е с т андарт ны е рас т во ры ? 19. Ч т о
с о бо й предс т авляю т
Го с ударс т венны е с т андарт ны е о браз ц ы
и
рабо ч и е с т андарт ны е о браз ц ы ? 3. И Н Ф О РМ А Ц И О Н Н ЫЙ Б ЛО К 3.1.О бщ иеполож ения м етода фотом етрии
Ф о т о ко ло ри мет ри ч ес ки е и з би рат ель но м
по гло щ ени и
вещ ес т во м
с лужат
и
ко ли ч ес т венно го
для
мет о ды
элект ро магни т но го и с с ледо вани я
анали з а и з луч ени я
с т ро ени я,
о с но ваны
на
анали з и руемы м
и дент и фи кац и и
и
анали з а с вет о по гло щ аю щ и х с о еди нени й. П ри ро да по ло с
по гло щ ени я в УФ (190-400 нм) и ви ди мо й (400-760 нм) о блас т ях с пект ра о ди нако ва и с вяз ана с ч и с ло м и рас по ло жени ем элект ро но в в по гло щ аю щ и х мо лекулах и
и о нах. В и нфракрас но й о блас т и (98-1000 мкм) о на в бо ль ш ей
с т епени с вяз ана с ко лебани ями ат о мо в в мо лекулах по гло щ аю щ его вещ ес т ва. П о эт о му в ли т ерат уре ч ас т о о пт и ч ес ки е с пект ры по гло щ ени я анали з и руемы х вещ ес т в наз ы ваю т
элект ро нны ми , а и нфракрас ны е - мо лекулярны ми . В
з ави с и мо с т и о т и с по ль з уемо йаппарат уры в фо т о мет ри ч ес ко м анали з е раз ли ч аю т с пект ро фо т о мет ри ч ес ки й мет о д - анали з по по гло щ ени ю мо но хро мат и ч ес ко го
8
и з луч ени я и фо т о ко ло ри мет ри ч ес ки й - анали з
по
по гло щ ени ю
по ли хро мат и ч ес ко го и з луч ени я. Оба мет о да о с но ваны на о бщ ем при нц и пе с ущ ес т во вани и про по рц и о наль но й з ави с и мо с т и между с вет о по гло -щ ени ем и ко нц ент рац и ейпо гло щ аю щ его вещ ес т ва в рас т во ре. Ко ли ч ес т венно е о пределени е в ви ди мо й о блас т и с пект ра не и меет при нц и пи аль ны х раз ли ч и й о т по до бны х и з мерени й в УФ -о блас т и . П ри менени е с т андарт ны х (ГС О и РС О) о браз ц о в о бяз ат ель но
во
вс ех с луч аях анали з а.
Ф о т о ко ло ри мет ри ч ес ки е
мет о ды ,
и с по ль з ую щ и е с равни т ель но нес ло жную аппарат уру, о бес печ и ваю т вы с о кую т о ч но с т ь (1-2%) и ш и ро ко при меняю т с я в ко ли ч ес т венно м анали з е. Для эт о го лекарс т венны е вещ ес т ва до лжны
бы т ь ли бо
с ами о краш ены , ли бо
дават ь
о краш енны е про дукт ы реакц и и при вз аи мо дейс т ви и с реакт и вами . П ри ч ем, ес ли ко ли ч ес т венно е о пределени е и с по ль з ует с я для анали з а лекарс т венно йс мес и , т о други е ко мпо нент ы не до лжны вз аи мо дейс т во ват ь с и с по ль з уемы м реакт и во м. Так, для ко ли ч ес т венно го о пределени я препарат о в, с о держащ и х фено ль ны й ги дро кс и л, при меняет с я реакц и я о браз о вани я аз о крас и т еля, для о пределени я 3кет о с т еро и до в
– реакц и я
с
ги драз и до м
и з о ни ко т и но во й ки с ло т ы ,
на
ги дро кс амо во йреакц и и о с но вано ко ли ч ес т венно е о пределени е с ло жны х эфи ро в, лакт о но в, лакт амо в и др. Окраш енно е с о еди нени е до лжно бы т ь до с т ат о ч но ус т о йч и вы м и
про ч ны м, а т акже с
по с т о янны м с о с т аво м, о т веч аю щ и м
о пределенно йхи ми ч ес ко йфо рмуле. П о с т о янны йс о с т ав о краш енно го с о еди нени я о бес печ и вает с т аби ль но с т ь о крас ки рас т во ра, ч т о являет с я о дни м и з факт о ро в т о ч но с т и фо т о мет ри ч ес ко го о пределени я. В фо т о мет ри ч ес ко м анали з е мо жно и с по ль з о ват ь т аки е с о еди нени я, ко т о ры е с о храняю т ус т о йч и вую о крас ку не менее 10-15 ми нут . Н а ус т о йч и во с т ь о краш енны х ко мплекс о в о каз ы ваю т вли яни е рН с реды , ко ли ч ес т во
до бавляемо го
реакт и ва и
по рядо к до бавлени я-с ли вани я
реакт и ва. Органи ч ес ки е рас т во ри т ели в фо т о мет ри ч ес ко м анали з е при меняю т для раз делени я лекарс т венны х вещ ес т в, по вы ш ени я ч увс т ви т ель но с т и и т о ч но с т и о пределени я (экс т ракц и о нная фо т о мет ри я).
9
В
фо т о мет ри ч ес ко м
мет о де и с по ль з ую т
т ри
с по с о ба
рас ч ет а
ко нц ент рац и й: по с т андарт но му рас т во ру, по кали бро во ч но му графи ку, по удель но му по каз ат елю с вет о по гло щ ени я. К
фо т о мет ри ч ес ки м
мет о дам
о т но с ят с я:
раз ли ч ны е
вари ант ы
ко ло ри мет ри и , фо т о ко ло ри мет ри и , экс т ракц и о нно йфо т о мет ри и .
Ко ло ри мет ри я
- мет о д ко ли ч ес т венно го анали з а, о с но ванны й на
ви з уаль но м с равнени и и нт енс и вно с т и о крас о крас т во ро в и с с ледуемо го вещ ес т ва и с т андарт но го о браз ц а. В ко ло ри мет ри и ч ас т о при меняю т мет о д с т андарт ны х с ери й и ли мет о д ш калы . Ко ло ри мет ри ч ес ки й анали з о т но с и т с я к экс прес с ны м мет о дам, но т о ч но с т ь его невы с о ка. Д л я про в ед ен и я и зм ерен и й го т о вят ш калу с т андарт ны х рас т во ро в. В ш т ат и в ус т анавли ваю т 3-10 про би ро к о ди нако во го ди амет ра и з о дно т и пно го с т екла. В первую про би рку вно с ят о пределенны й о бъем рас т во ра с т о ч но й ко нц ент рац и ейи с с ледуемо го вещ ес т ва. Во вс е по с ледую щ и е про би рки вли ваю т по с т епенно во з рас т аю щ и е на о дну и т у же вели ч и ну ко ли ч ес т ва т о го же рас т во ра т о ч но й ко нц ент рац и и . Зат ем во вс е про би рки до бавляю т во ду и ли друго й рас т во ри т ель с т аки м рас ч ет о м, ч т о бы о бъем жи дко с т и во вс ех про би рках бы л о ди нако в. Ж и дко с т и
в про би рках перемеш и ваю т , при бавляю т
в каждую
о ди нако во е ко ли ч ес т во реакт и во в для по луч ени я о крас ки . Одно временно т о ч ны й о бъем и ссл ед уем о го раст в о ра вно с ят в про би рку и з т ако го же с т екла и ди амет ра, до бавляю т нео бхо ди мы йо бъем рас т во ри т еля и реакт и вы в т аки х же ко ли ч ес т вах. Зат ем ч ерез указ анно е в мет о ди ке время с равни ваю т и нт енс и вно с т ь о краш и вани я и с с ледуемо го рас т во ра с и нт енс и вно с т ь ю
о крас ки жи дко с т ей в про би рках
с т андарт но й с ери и и ус т анавли ваю т , с како й про би рко й с т андарт но й с ери и с о впадает о крас ка и с с ледуемо го рас т во ра. П ри мер (с м. П ри ло жени е).
Ф о т о ко ло ри мет ри ч ес ки ймет о д.
Эт о т мет о д о с но ван на и з мерени и
10
с т епени
по гло щ ени я
вы делени я
с вет а о краш енны ми
мо но хро мат и ч ес ко го
и з луч ени я.
рас т во рами
Зави с и мо с т ь
без
и нт енс и вно с т и
по гло щ ени я с вет о во го по т о ка, ко т о ры йпро ш ел ч ерез рас т во р, о т т о лщ и ны с ло я и ко нц ент рац и и вещ ес т ва в рас т во ре вы ражает с я о бъеди ненны м з ако но м Б угераЛ амберт а-Б ера. С о глас но
эт о му з ако ну, о пт и ч ес кая пло т но с т ь (экс т и нкц и я)
рас т во ра про по рц и о наль на т о лщ и не его с ло я, ко нц ент рац и и вещ ес т ва в рас т во ре и ко эффи ц и ент у по гло щ ени я (при ро де вещ ес т ва). Опт и ч ес кую
пло т но с т ь
рас т во ро в
и з меряю т
с
по мо щ ь ю
ф о т о эле к т ро к о ло ри м е т ро в . П ри нци п рабо т ы эт и х при бо ро в з аклю ч ает с я в т о м, ч т о с вет о во йпо т о к о пределенны х дли н во лн при про хо ждени и ч ерез кю вет у с о краш енны м
рас т во ро м
и ли
рас т во ри т елем
по падает
на
фо т о элемент ,
превращ аю щ и й с вет о вую энерги ю в элект ри ч ес кую . Для вы делени я луч ей с о пределенны м
и нт ервало м
дли н
во лн
фо т о ко ло ри мет ры
с вет о фи ль т рами . В нас т о ящ ее время при меняю т
с набжены
фо т о элект ро ко ло ри мет ры
раз ли ч ны х с и с т ем. Техни ка фо т о ко ло ри мет ри ч ес ки х о пределени й по дро бно о пи с ана в пас по рт ах, ко т о ры ми с набжены при бо ры . Ф о т о ко ло ри мет ри ч ес ки е мет о ды до с т ат о ч но т о ч ны (1-3%) и ш и ро ко при меняю т с я для о пределени я ко нц ент рац и и вещ ес т в. К о нце нт раци ю ко ло ри мет ро в
мо жно
рас про с т раненны м
и
и с с ледуемы х о пределят ь при емлемы м
вещ ес т в
с
нес ко ль ки ми
по мо щ ь ю
фо т о элект ро -
с по с о бами .
Н аи бо лее
для анали т и ч ес ко й с лужбы
апт еч ны х
уч реждени й являет с я ус т ано влени е ко нц ент рац и и вещ ес т в пут ем с равнени я о пт и ч ес ко йпло т но с т и с т андарт но го и и с с ледуемо го рас т во ро в и ли о пределени е ко нц ент рац и и вещ ес т в по кали бро во ч но му графи ку. П ри нци п
о пре де ле ни я и с с ледуемы х вещ ес т в пут е м
с вет о по гло щ ени я со ст андарт ны м
раст в о ро м
срав не ни я и х
с о с т о и т в с ледую щ ем. В дв е
ко лбо ч ки вно с ят о ди нако вы е о бъемы с т андарт но го и и с с ледуемо го рас т во ро в. К рас т во рам при бавляю т о ди нако во е ко ли ч ес т во реакт и во в, по луч енны е рас т во ры
11
перено с ят в две кю вет ы о ди нако во го
ди амет ра и о пределяю т и х о пт и ч ес кую
пло т но с т ь . С о держани е и с с ледуемо го вещ ес т ва в про бе о пределяю т по фо рмуле:
Сx =
Dx ⋅ Co , Do
где: Сх - с о держани е вещ ес т ва в 1 мл и с с ледуемо го рас т во ра; Со - с о держани е вещ ес т ва в 1 мл с т андарт но го рас т во ра; Dx - о пт и ч ес кая пло т но с т ь и с с ледуемо го рас т во ра; Dо - о пт и ч ес кая пло т но с т ь с т андарт но го рас т во ра. П ри
с ери йны х о пределени ях к о нце нт раци ю
и с с ледуемо го
вещ ес т ва
ц елес о о браз нее ус т анавли ват ь по к али бро в о чно м у граф и к у. Для по с т ро ени я кали бро во ч но го графи ка го т о вят рас т во р с т о ч ны м с о держани ем о пределяемо го вещ ес т ва (с т андарт ны й рас т во р). Рас т во р по мещ аю т в кю вет ы
о ди нако во го
ди амет ра. Зат ем в ряд ко лб вно с ят раз ли ч ны е о бъемы с т андарт но го рас т во ра, при бавляю т рас т во ри т ель с т аки м рас ч ет о м, ч т о бы о бъемы вс ех эт и х рас т во ро в бы ли о ди нако вы . Зат ем вли ваю т равны е ко ли ч ес т ва реакт и ва. Далее и з меряю т о пт и ч ес кую пло т но с т ь по луч енны храс т во ро в при с о о т вет с т вую щ ем с вет о фи ль т ре в кю вет ах с о ди нако во й т о лщ и но й с ло я. Рас т во ро м с равнени я с лужи т с мес ь реакт и во в (без и с с ледуемо го вещ ес т ва), ко т о ры е и с по ль з о вали с ь для по луч ени я о краш енно го с о еди нени я. Зави с и мо с т ь
о пт и ч ес ко й пло т но с т и
от
ко нц ент рац и и
рас т во ра
предс т авлена на ри с унке 1. Д
Ри с .1
0,3 _ 0,2 _ 0,1 _ 0,1 0,2 0,3 0,4
мкг/мл С
12
Н а о с но вани и по луч енны х данны х на ми лли мет ро во йбумаге вы ч ерч и ваю т кали бро во ч ны йграфи к. Н а о с и абс ц и с с о т клады ваю т с о держани е вещ ес т ва, а на о си
о рди нат
- о пт и ч ес ки е пло т но с т и
с о о т вет с т вую щ и х рас т во ро в. Рас ч ет
с о держани я вещ ес т ва в и с с ледуемо м рас т во ре про и з во дят по с ле нанес ени я на о с ь о рди нат вели ч и ны и з меренно й о пт и ч ес ко й пло т но с т и и с пы т уемо го рас т во ра и о пус кани я перпенди куляра на о с ь абс ц и с с о т т о ч ки перес еч ени я найденно й о пт и ч ес ко й пло т но с т и
с
кали бро во ч но й кри во й.
То ч ка
перес еч ени я
перпенди куляра и о с и абс ц и с с по кажет с ко ль ко вещ ес т ва в о бъеме и с с ледуемо го рас т во ра, в зят о го для о пре де ле ни я. Кали бро во ч ны е графи ки вы ч ерч и ваю т для с о о т вет с т вую щ его препарат а и пери о ди ч ес ки про веряю т и х. П о д т ерми но м
"экст ракци о н н ая ф о т о м ет ри я" по ни маю т
мет о д
анали з а, ко т о ры йо с но ван на о браз о вани и ц вет ны х и ли о краш енны х про дукт о в, с по с о бны х
легко
экс т раги ро ват ь с я
с о о т вет с т вую щ и м
о ргани ч ес ки м
рас т во ри т елям. Вс луч ае экс т ракц и о нно -фо т о мет ри ч ес ко го мет о да для раз делени я вещ ес т в при меняю т
нес меш и ваю щ и ес я
с
во до й
о ргани ч ес ки е
рас т во ри т ели .
Экс т раги ро вани е по з во ляет з нач и т ель но по вы с и т ь ч увс т ви т ель но с т ь о пределени я з а с ч ет ко нц ент ри ро вани я о пределяемо го ко мпо нент а. В
о с но ве
фо т о мет ри ч ес ки х
мет о до в
лежи т
о с но вно й
з ако н
с вет о по гло щ ени я - з ако н Л амберт а-Б угера-Б ера. Он фо рмули рует с я т ак: Опт и ч ес кая пло т но с т ь рас т во ра прямо про по рц и о наль на ко нц ент -рац и и о пределяемо го вещ ес т ва, дли не кю вет ы и вели ч и не по каз ат еля по гло щ ени я, ч т о вы ражает с я уравнени ем: А=К*С *l; где : А - о пт и ч ес кая пло т но с т ь ; К- ко эффи ц и ент по гло щ ени я; l - т о лщ и на с ло я о краш енно го рас т во ра, в с м.; С - ко нц ент рац и я рас т во ра (%).
13
Графи ч ес кая
з ави с и мо с т ь
вели ч и ны пло т но с т и о т ко нц ент рац и и
вещ ес т ва вы ражает с я прямо й ли ни ей, про хо дящ ей ч ерез
нач ало ко о рди нат
(Ри с .1). Ко эффи ц и ент
по гло щ ени я
по гло щ аю щ и х с о еди нени й. Он
являет с я
мо жет
важно й
и с по ль з о ват ь с я
характ ери с т и ко й для
о пределени я
по дли нно с т и , ч и с т о т ы и ко ли ч ес т венно го с о держани я и с с ледуемы хвещ ес т в. 3.2. ЗА Д А Н И Я Д ЛЯ СА М О П О Д ГО Т О В К И Для вы по лнени я практ и ч ес ко йрабо т ы с т удент до лжен: • по вт о ри т ь т ео рет и ч ес ки е о с но вы фо т о ко ло ри мет ри ч ес ко го мет о да анали з а; • и з уч и т ь во з мо жно с т и и с по ль з о вани я данно го мет о да в ко ли ч ес т венно м анали з е лекарс т венны х препарат о в, го т о вы х лекарс т венны х фо рм, фи т о препарат о в, би о ло ги ч ес ки хжи дко с т ей. • з нат ь раз ли ч ны е ви ды фо т о мет ри и ; • з нат ь о т ли ч и е фо т о ко ло ри мет ри и о т с пект ро фо т о мет ри и ; • о з нако ми т ь с я с ус т ро йс т во м фо т о ко ло ри мет ра и прави лами рабо т ы на нем; • по вт о ри т ь с по с о бы рас ч ет а ко нц ент рац и и о пределяемы хвещ ес т в; • умет ь реш ат ь т и по вы е з адач и по фо т о ко ло ри мет ри и ; • с о брат ь карт о т еку по и с по ль з о вани ю фо т о ко ло ри мет ри и в фармац евт и ч ес ко м анали з е по з адани ю препо дават еля. 4. П ЛА Н ЗА Н Я Т И Я 1. С о бес едо вани е для о пределени я и с хо дно го уро вня по дго т о вки с т удент о в к з анят и ю . 2. Рас пределени е з адани й для с амо с т о ят ель но й рабо т ы вы по лняет 5 з адани й). 3. Вы по лнени е с амо с т о ят ель но йрабо т ы . 4. П ро верка вы по лнени я з адани я.
с т удент о в (с т удент
14
5. Ко нт ро ль
з нани й
и
умени й, по луч енны хс т удент о м.
5. ЛИ Т Е РА Т У РА Ос но вная ли т ерат ура 1. Б ели ко в В.Г. Ф армац евт и ч ес кая хи ми я: В2-х ч .-М .: Вы с ш . ш к., 1996.–Ч . 2: С пец и аль ная фармац евт и ч ес кая хи ми я: Уч еб. для фармац . и н-т о в / В. Г. Б ели ко в. – 608 с . 2. Б ели ко в В.Г. Ф армац евт и ч ес кая хи ми я: В2-х ч .- М .: Вы с ш . ш к., 1993.- Ч . 1: Общ ая фармац евт и ч ес кая хи ми я: Уч еб. для фармац . и н-т о в /В.Г. Б ели ко в.-432 с . До по лни т ель ная ли т ерат ура 3. Б ели ко в В.Г. С уль фо фт алеи но вы е крас и т ели в кач ес т ве экс т ракц и о нны х реагент о в на ч ет верт и ч ны е аммо ни евы е с о еди нени я / В. Г. Б ели ко в, Г. И . Л укь янч и ко ва, Л . Н . Дуккардт // Ф армац и я.–1983.–№ 1.- С .26-29. 4. Б улат о в М .И . П ракт и ч ес ко е руко во дс т во по фо т о мет ри ч ес ки м мет о дам анали з а / М . И . Б улат о в, И . П . Кали нки н.- Л .: Х и ми я, 1988. – 432 с . 5. Го с ударс т венная фармако пея С С С Р.-10-е и з д.–М .: М еди ц и на, 1968.-1079 с . 6. Го с ударс т венная фармако пея С С С Р.-11-е и з д. –М .: М еди ц и на, 1987.-Ч . 1 7. Б ели ко в В. Г. Л або рат о рны е рабо т ы по фармац евт и ч ес ко йхи ми и : Уч ебно е по с о би е для фармац . и н-т о в и фармац . фак. мед. и н-т о в / В.Г. Б ели ко в, Е. Н . Вергейч и к, В. Е. Го дяц ки йи др.; П о д ред. В. Г. Б ели ко ва.– М .: Вы с ш . ш к., 1989. – 375 с . 8. Кулеш о ва
М .И . П о с о би е по хи ми ч ес ко му анали з у лекарс т в / М . И .
Кулеш о ва, Л . Н . Гус ева, О. К. С и ви ц кая; П о д ред. М . И . Кулеш о во й.– М .: М еди ц и на, 1974.–248 с . 9. Кулеш о ва М . И . Анали з лекарс т венны х фо рм, и з го т о вляемы х в апт еках: П о с о би е - / М . И . Кулеш о ва, Л . Н . Гус ева, О. К. С и ви ц кая. – 2-е и з д. перераб. и до п. – М .: М еди ц и на, 1989.– 288 с .
15
10. Б ели ко в В.Г. М ет о ди ч ес ки е реко мендац и и анали з у мно го ко мпо нент ны х лекарс т венны х фо рм
по
ко ли ч ес т венно му
/ В. Г. Б ели ко в, Г. И .
Л укь янч и ко ва; по д ред. В.Г. Б ели ко ва. – П ят и го рс к: Го с . фармац . академи я, 1988. – 95 с . 11. Ки с ло т а ац ет и лс али ц и ло вая. Ф С 42-2688-99. 12. Ко ренман Н . М . Ф о т о мет ри ч ес ки йанали з / Н . М . Ко ренман – М .: Х и ми я, 1975. – 359 с . 13. Ко ренман Н . М . Экс т ракц и я в анали з е о ргани ч ес ки х вещ ес т в / Н . М . Ко ренман – М .: Х и ми я, 1977. –200 с . 14. Л укь янч и ко ва Г.И . Экс т ракц и о нно –фо т о мет ри ч ес ко е о пределени е ко т арни на хло ри да и мет и лено во го с и него / Г. И . Л укь янч и ко ва, Э. Я .М ус аэль янц , // Н ауч .–практ . реф. с б. /Н И И ТЭХ И М – М .; 1979.- № 10.- С . 71-73. 15. М З РФ . О ко нт ро ле кач ес т ва лекарс т венны х с редс т в, и з го т о вляемы х в апт еках: П ри каз М З РФ № 214 о т 15. 08. 97 г. 16. М З РФ . О но рмах о т кло нени й, до пус т и мы х при и з го т о влени и лекарс т венны х с редс т в и фас о вке про мы ш ленно йпро дукц и и в апт еках: П ри каз М З РФ № 305 о т 16. 10. 97 г. 17. С ауш ки на А. С . С бо рни к з адач по фармац евт и ч ес ко й хи ми и : Уч ебно е по с о би е по фармац .хи ми и для с т удент о в фармац . и н-т о в и фармац . фак. мед. ВУЗо в / А. С . С ауш ки на; П о д ред. В. Г. Б ели ко ва. – П ят и го рс к: И з д-во П ят ГФ А, 2003. – 274 с . 18. С ено в Л . П . Руко во дс т во клабо рат о рны м з анят и ям по фармац евт и ч ес ко й хи ми и / Л . П . С ено в – М .: М еди ц и на, 1978. –360 с . 19. Таблет ки угля акт и ви ро ванно го 0,25 и ли 0,5. Ф С 42-3246-95 20. Ф урац и ли н. Ф С 42-2522-88 21. С и пли вая Л . Е. М ет о ди ч ес ки е указ ани я к практ и ч ес ки м з анят и ям по фармац евт и ч ес ко й хи ми и
для и но с т ранны х с т удент о в ч ет верт ы х курс о в
фармац евт и ч ес ки х факуль т ет о в /Л . Е. С и пли вая, А. И . С ли вки н, Н . Д. Афо ни на;
16
П о д ред. Л . Е. С и пли во й. – Во ро неж: РИ Ц ВГУ, 1996. –91с . 22. Рас т во р нафт и з и на 0,05 и 0,1%. Ф С 42-1217-78 6. СА М О СТ О Я Т Е ЛЬ Н А Я РА Б О Т А СТ У Д Е Н Т О В 6.1. П о дго т о вка реферат о в по т еме элект и вно го курс а ТЕМ Ы РЕФ ЕРАТОВ: 1. Тео рет и ч ес ки е о с но вы фо т о мет ри ч ес ко го мет о да анали з а. 2. С хо дс т во , о т ли ч и е и с пец и фи ка с пект ро фо т о мет ри ч ес ко го и фо т о ко ло ри мет -ри ч ес ко го мет о до в анали з а. 3. И с по ль з о вани е раз ли ч ны х ви до в фо т о ко ло ри мет ри и в анали з е го т о вы х лекарс т венны хфо рм. 4.
И с по ль з о вани е
фо т о ко ло ри мет ри ч ес ко го
мет о да
для
анали з а
лекарс т венны хфо рм и нди ви дуаль но го и з го т о влени я. 5. Ос о бенно с т и вари ант о в фо т о мет ри ч ес ко го анали з а (с пект ро фо т о мет ри и , фо т о ко ло ри мет ри и , ви з уаль но йко ло ри мет ри и ). 6. Ти пы
хи ми ч ес ки х реакц и й, и с по ль з уемы е в фо т о ко ло ри мет ри ч ес ко м
анали з е лекарс т венны хвещ ес т в. 7. Ко ло ри мет ри я как раз но ви дно с т ь
мет о да фо т о ко ло ри мет ри и
и
ее
и с по ль з о вани е в фармац евт и ч ес ко м анали з е. 8. И с по ль з о вани е экс т ракц и о нно йфо т о мет ри и в фармац евт и ч ес ко м анали з е. 9. Ви з уаль ная ко ло ри мет ри я в анали з е лекарс т венны хфо рм. 10.
Ос о бенно с т и
экс т ракц и о нно -фо т о мет ри ч ес ко го
мет о да
и
его
и с по ль з о вани е в фармац евт и ч ес ко м анали з е. 6.2. Вы бо р о пт и маль ны х ус ло ви йи раз рабо т ка мет о ди ки фо т о мет ри ч ес ко го о пределени я препарат а (8-10 ч ас ). ОБ Ъ ЕКТЫ И С С Л ЕДОВАН И Я :
П ро пи с и (1- 6)
а) и с по ль з о вани е реакц и и вз аи мо дейс т ви я с рас т во ро м ги дро кс и да нат ри я:
17
Рут и н [7, 9]
1. 2. Ф урац и лли н
[5, 7, 8]
3. Ф урадо ни н
[7]
4. Ф ураз о ли до н
[7]
б) и с по ль з о вани е реакц и и ди аз о т и ро вани я: 5. Эт акри ди на лакт ат
[8]
в) и с по ль з о вани е реакц и и о ки с лени я 6. Ко феи н-бенз о ат нат ри я Н а при мере о дно го и з вы бранны хпрепарат о в вы по лни т ь экс пери мент аль но е и с с ледо вани я: 1. И з уч и т ь
о пт и ч ес ки й с пект р
и
с вет о фи ль т ра рас т во ра, при го т о вленно го
о с ущ ес т ви т ь по
вы бо р
рабо ч его
мет о ди ке ко ли ч ес т венно го
о пределени я. 2. И з уч и т ь ус т о йч и во с т ь при го т о вленно го рас т во ра в т еч ени е 5-15 ми нут . 3. П ри го т о ви т ь 5 рас т во ро в РС О анали з и руемо го вещ ес т ва и и з мери т ь и х о пт и ч ес кую пло т но с т ь . 4. Определи т ь грани ц ы по дч и нени я о пт и ч ес ко й пло т но с т и о с но вно му з ако ну с вет о по гло щ ени я. 5. Рас с ч и т ат ь удель ны й по каз ат ель с вет о по гло щ ени я для препарат а в при го т о вленны храс т во рах. Н айт и с реднее з нач ени е. 6. Раз рабо т ат ь
мет о ди ку ко ли ч ес т венно го
о пределени я вы бранно го
препарат а. 7. Рас с ч и т ат ь
ко ли ч ес т венно е
с о держани е
препарат а,
и с по ль з уя
кали бро во ч ны й графи к, удель ны й по каз ат ель с вет о по гло щ ени я и рас т во р рабо ч его с т андарт но го о браз ц а. 8. Н а о с но вани и 6 о пределени йрас с ч и т ат ь при мер по мо дель но йс мес и с т ат и с т и ч ес ки е характ ери с т и ки предло женно ймет о ди ки анали з а (1,2,5,12).
18
9. Апро би ро ват ь мет о ди ку на
при мере лекарс т венно йфо рмы ,
при го т о в-ленно й с т удент ами . 6.3. И с по ль з о вани е фо т о ко ло ри мет ри ч ес ко го мет о да в анали з е го т о вы х лекарс т венны хфо рм (2 ч ас .). ОБ Ъ ЕКТЫ И С С Л ЕДОВАН И Я : П ро пи с и (7-9) 7 Рас т во р адренали на ги дро хло ри да для и нъекц и й. [5]. 8. Таблет ки фураз о ли до на
[5].
9. Рас т во р нафт и з и на 0,05 и 0,1% -10,0
[22].
1. П ро вес т и фо т о мет ри ч ес ки й анали з вы бранно й лекарс т венно й фо рмы (по о пи с анно ймет о ди ке). 2. Оц ени т ь кач ес т во
лекарс т венно й фо рмы
и с равни т ь по луч енны е
рез уль т ат ы с т ребо вани ями при каз о в 214, 305 [15–16]. 6.4. И с по ль з о вани е фо т о ко ло ри мет ри ч ес ко го
мет о да для о пределени я
ч и с т о т ы препарат о в (2 ч ас .). ОБ Ъ ЕКТЫ И С С Л ЕДОВАН И Я : П ро пи с и (10-11) 10. Ац ет и лс али ц и ло вая ки с ло т а
[5].
11. Уго ль акт и ви ро ванны й
[5].
1. П ро вес т и о пределени е при мес и в о дно м и з вы бранны х лекарс т венны х с редс т в. 2. С равни т ь с данны ми фармако пейно йс т ат ь и и с делат ь з аклю ч ени е о кач ес т ве препарат а. 6.5. М ет о д ви з уаль но й ко ло ри мет ри и в анали з е лекарс т венны х фо рм и нди ви дуаль но го и з го т о влени я (2 ч ас .). ОБ Ъ ЕКТЫ И С С Л ЕДОВАН И Я : П ро пи с и (12-16)
19
12*. Рас т во р Ри бо флави на 0,02%- 10,0
[8,9].
13*. Рас т во р ди каи на 0,5%-10,0 М ет и лено во го с и него - 0,015. 14*. Ки с ло т а фо ли евая 0,0001 С ахара 0,2
[8].
15*. Л ево ми ц ет и на 0,25%-10,0 Ки с ло т ы бо рно й0,2 (и ли нат ри я хло ри да 0,09). 16. Рас т во ра фурац и ли на 0,02%-10,0 Н ат ри я хло ри да 0,09. 1. П ро вес т и ко ли ч ес т венны й анали з вы бранно й лекарс т венно й фо рмы мет о до м ви з уаль но йко ло ри мет ри и . 2. Оц ени т ь кач ес т во анали з и руемо й лекарс т венно й фо рмы и с равни т ь по луч енны е рез уль т ат ы с т ребо вани ями при каз о в 214, 305 [15 – 16 ] 6.6. И с по ль з о вани е с о ч ет ани я фо т о ко ло ри мет ри ч ес ко го и т и т ри мет ри ч ес ки х мет о до в в анали з е мно го ко мпо нент ны х лекарс т венны хфо рм (4-5 ч ас .). ОБ Ъ ЕКТЫ И С С Л ЕДОВАН И Я : П ро пи с и (17-27) а) и с по ль з о вани е с о бс т венно го с вет о по гло щ ени я: 17. Глю ко з ы 25% - 100,0 М ет и лено во го с и него 1,0
[10].
18. Ри бо флави на 0,005 Ки с ло т ы ас ко рби но во й С ахара по 0,1
[21].
19. Ри бо флави на 0,002 Рас т во ра нат ри я хло ри да 0,9% - 10,0
[8].
20. Ри бо флави на 0,002 Рас т во ра кали я и о ди да 3% - 10,0
[8,21].
20
21. Ри бо флави на 0,001 Ки с ло т ы ас ко рби но во й0,02 Кали я и о ди да 0,2 Рас т во ра глю ко з ы 2% - 10,0
[8,21].
22. Рас т во ра ри бо флави на 0,05% - 50,0 Н о во каи на 1,0 Ки с ло т ы ни ко т и но во й0,3 Ди медро ла 0,04
[10].
б) и с по ль з о вани е реакц и и вз аи мо дейс т ви я с рас т во ро м ги дро кс и да нат ри я: 23. Ки с ло т ы ац ет и лс али ц и ло во й0,3 Рут и на 0,02 С ахара 0,2
[8,21].
24. Ф урац и ли на 0,002 Рас т во ра бо рно йки с ло т ы 2% - 10,0
[8,21].
25*. Ф урац и ли на 0,001 С т репт о ц и да рас т во ри мо го 0,8% - 10,0
[8,9,21].
26. Рас т во ра фурац и ли на 1:5000 - 10,0 С уль фац и ла нат ри я 2,0 Ки с ло т ы бо рно й0,1
[8,9,10].
27. Эри т ро ми ц и на 0,02 г Глю ко з ы 0,2 1. П ро вес т и ко ли ч ес т венны йанали з и нгреди ент о в вы бранно йлекарс т венно й фо рмы фо т о ко ло ри мет ри ч ес ки м и т и т ри мет ри ч ес ки м мет о дами . 2. Оц ени т ь кач ес т во и с с ледуемо йлекарс т венно йфо рмы .
21
6.7. И с по ль з о вани е экс т ракц и о нно й фо т о мет ри и в анали з е лекарс т венны х фо рм (4-5 ч ас ). ОБ Ъ ЕКТЫ И С С Л ЕДОВАН И Я : П ро пи с и (28 - 36) а) о браз о вани е и о нны х ас с о ц и ат о в с крас и т елями : 28. Таблет ки ко т арни на хло ри да
[13].
29. М аз ь деками но вая 1% - 30,0
[13].
30. Ко т арни на хло ри да 0,2 Во ды для и нъекц и й10,0 31. Рас т во ра ц ет и лпи ри ди ни я хло ри да 1:7500 - 300,0 32. Рас т во р ац екли ди на для и нъекц и й0,2%
[3,5]. [5].
33. Каль ц и я хло ри да 0,5 М ет и лено во го с и него 0,02 Гекс амет и лент ет рами на 10,0 С пи рт а 95% - 37,5 Во ды о ч и щ енно йдо 250,0
[10].
34. Н о во каи на 0,5 М ет и лено во го с и него 0,05 Во ды о ч и щ енно йдо 24,0
[10].
35*. Анес т ез и на 0,3 Экс т ракт а крас авки с ухо го 0,03 36*. Ф ени лс али ц и лат а 0,3 П апавери на ги дро хло ри да 0,03 Экс т ракт а крас авки с ухо го 0,03 1. П ро вес т и анали з вы бранно й лекарс т венно й фо рмы с и с по ль з о вани ем экс т ракц и о нно йфо т о мет ри и . 2. Оц ени т ь
кач ес т во
лекарс т венно й фо рмы
рез уль т ат ы с т ребо вани ями при каз о в 214, 305 [15-16]
и
с равни т ь
по луч енны е
22
6.8.
И с по ль з о вани е
фо т о ко ло ри мет ри ч ес ко го
мет о да
для
анали з а
лекарс т венно го рас т и т ель но го с ы рь я (4-5ч ас о в). ОБ Ъ ЕКТЫ И С С Л ЕДОВАН И Я : П ро пи с и (37-40) 37. Ко ра круш и ны
[6].
38. Л и с т ь я вакт ы т рехли с т но й
[6].
39. Ко рень ревеня
[6].
40. Ко рневи щ а и ко рни марены крас и ль но й
[6].
1. П ро вес т и ко ли ч ес т венны йанали з дейс т вую щ и х вещ ес т в лекарс т венно го рас т и т ель но го с ы рь я фо т о ко ло ри мет ри ч ес ки м мет о до м. 2. Оц ени т ь кач ес т во лекарс т венно го рас т и т ель но го с ы рь я в с о о т вет с т ви и с т ребо вани ями Ф С .
[6].
7. Ф О РМ А О Т Ч Е Т Н О СТ И СТ У Д Е Н Т О В (О Ф О РМ ЛЕ Н И Е П РО Т О К О ЛА ) 1.
П ерви ч ная о т ч ёт но с т ь :
1.1.
П редс т ави т ь ли т ерат урны йо бз о р в фо рме реферат а.
1.2.
Во время бес еды с препо дават елем о т вет и т ь на ко нт ро ль ны е во про с ы (не
бо лее 2-х), т ес т о вы е з адани я (не бо лее 2-х) и реш и т ь с и т уац и о нную о буч аю щ ую з адач у. 1.3.
П ро вес т и
экс пери мент аль ны е
и с с ледо вани я
по
каждо му
з адани ю ,
рез уль т ат ы о фо рми т ь в ви де про т о ко ло в. 2.
Вт о ри ч ная о т ч ет но с т ь :
2.1.
Офо рми т ь по луч енны е рез уль т ат ы в ви де курс о во йрабо т ы (элект и ва).
2.2.
В раз деле “Экс пери мент аль ны е и с с ледо вани я” до бави т ь
по драз дел:
“Обс уждени е рез уль т ат о в” и “Вы во ды ”, 2.3.
Защ и т и т ь курс о вую рабо т у (Элект и в) на з ас едани е С Н О кафедры и ли на
23
с т уденч ес ко й ко нференц и и
и ли
о публи ко ват ь
по луч енны е
рез уль т ат ы . 8. ЗА Д А Н И Я Д ЛЯ У СП Е Ш Н О СТ И У СВ О Е Н И Я У Ч Е Б Н О ГО М А Т Е РИ А ЛА (Т Е СТ Ы) Б и лет 1 С о о т нес и т е парамет ры фи з и ко -хи ми ч ес ки х мет о до в с и х о бо з нач ени ями и еди ни ц ами и з мерени й. 1. То лщ и на по гло щ аю щ его с ло я (кю вет ы ) А) Н ано мет р 2. Удель но е вращ ени е Б ) С ант и мет р 3. П о каз ат ель прело млени я В) Дец и мет р 4. Дли на во лны в УФ и ви ди мо йо блас т и с пект ра С ) Б ез о бо з нач ени я и 5. То лщ и на с ло я жи дко с т и (дли на т рубки ) еди ни ц и з мерени я Д) Обрат ны йс ант и мет р Е) М и нус (-) и ли (+) Б и лет 2 1.Ус т ано ви т е с о о т вет с т ви е: Ос но вны е т ерми ны фо т о мет ри и – Определени е 1. Х ро мо фо ры А) С вет , по гло щ аю щ и йс я при 2. Аукс о хро мы ко нкрет но йдли не во лны 3. М о но хро мат и ч ес ки йс вет Б ) С вет , по гло щ аю щ и йс я при 4. Н емо но хро мат и ч ес ки йс вет уз ко м и нт ервале дли н во лн (по ли хро мат и ч ес ки й) В) Х и ми ч ес ки е группы , о бус лавли ваю щ и е с вет о по гло щ ени е Г) Х и ми ч ес ки е группы , ус и ли ваю щ и е с вет о по глащ ени е
Б и лет 3 1. Анали т и ч ес кая дли на во лны 2. Ви ди мая о блас т ь с пект ра 3. Уль т рафи о лет о вая о блас т ь с пект ра 4. То лщ и на по гло щ аю щ его с ло я
А) С ант и мет р (с м) Б ) Дли на во лны с макс и маль но й о пт и ч ес ко йпло т но с т ь ю В) С пект раль ная о блас т ь о т 200 до 800 нм Г) С пект раль ная о блас т ь о т 200 до 400 нм
24
Б и лет 4 1. С вет о фи ль т ры 2. М о но хро мат о р 3. Ф о т о элемент ы 4. Опт и ч ес кая пло т но с т ь
Б и лет 5 1. Зако н Б угера-Л амберт а-Б ера 2. Кали бро во ч ны йграфи к С т андарт ны е о браз ц ы 3. С пект р
А) Ч ас т ь фо т о ко ло ри мет ра, вы деляю щ ая уз ки йи нт ервал дли н во лн Б ) Ч ас т ь с пект ро фо т о мет ра, вы деляю щ ая с вет ко нкрет но йдли ны во лны В) Ус т ро йс т во для прео браз о вани я с вет о во йэнерги и в элект ри ч ес кую Г) От но ш ени е ло гари фма и нт енс и вно с т и и з луч ени я падаю щ его на вещ ес т во к и нт енс и вно с т и и з луч ени я, про ш едш его ч ерез вещ ес т во
А) Ус т о йч и вы е хи ми ч ес ки е с о еди нени я с по вы ш енны ми т ребо вани ями ккач ес т ву Б ) Графи ч ес ко е и з о бражени е з ави с и мо с т и о пт и ч ес ко йпло т но с т и о т дли ны во лны падаю щ его на рас т во р с вет а В) Графи ч ес ко е и з о бражени е прямо йпро по рц и о наль но й з ави с и мо с т и о пт и ч ес ко йпло т но с т и о т ко нц ент рац и и рас т во ренно го вещ ес т ва
Б и лет 6 С о о т нес и т е фо т о мет ри ч ес ки е мет о ды анали з а с ус ло ви ями и х про ведени я А) С пект ро фо т о мет ри ч ес ки й 1. Окраш енны е рас т во ры Б ) Ф о т о ко ло ри мет ри ч ес ки й 2. Б ес ц вет ны е рас т во ры 3. М о но хро мат и ч ес ки йс вет 4. Н емо но хро мат и ч ес ки йс вет (по ли хро мат и ч ес ки й) 5. Уль т рафи о лет о вая о блас т ь (УФ ) 6. Ви ди мая о блас т ь с пект ра 7. С пект ро фо т о мет р 8. Ф о т о ко ло ри мет р
25
9. Н або р с вет о фи ль т ро в 10. Ш кала дли н во лн а- прави ль ны йо т вет б- прави ль ны йо т вет в- прави ль ны йо т вет г- прави ль ны йо т вет д- прави ль ны йо т вет
1,4,6,8,9 1,3,5,6,8 2,4,6,7,9 1,2,3,5,6,7,10 1,3,6,8,10
Б и лет 7 С о о т нес и т е лекарс т венно е вещ ес т во и реакт и в с с о еди нени ем, по о крас ке ко т о ро го про во ди т с я фо т о мет ри ч ес ко е о пределени е 1. Н о во каи н, пара- ди мет и лА) Аз о крас и т ель ами но бенз аль деги д Б ) Ги дро кс амат желез а 2. Н о рс уль фаз о л, нат ри я ни т ри т , В) Ос но вани е Ш и ффа ки с ло т а хло ри с т о во до ро дная, Г) Ац и -с о ль щ ело ч но йрас т во р β-нафт о ла Д) С о бс т венная о крас ка 3. Ф урац и ли н, нат ри я ги дро кс и д анали з и руемо го с о еди нени я 3. Ри бо флави н, во да Е) Умень ш ени е и нт енс и вно с т и 4. Ки с ло т а ас ко рби но вая, о крас ки реакт и ва 2,6,- ди хло рфено ли ндо фено лят нат ри я
9.
П РИ ЛО Ж Е Н И Я
9.1. М ет о ди ки анали з а (1-9) П рилож ение№ 1 П ро пи с ь 12. Раст в о р ри бо ф лав и на 0,02% -10м л Рибофлав ин. В изуальная колорим етрия В т ри ко ли бро ваны е про би рки и з о дно т и пно го с т екла и о ди нако во го ди амет ра о т мери ваю т пи пет ко й: в первую − 0,9 мл, во вт о рую − 1,1 мл с т андарт но го 0,02 % рас т во ра ри бо флави на, в т рет ь ю −1 мл и с с ледуемо го 0,02% рас т во ра ри бо флави на. Во вс е про би рки до бавляю т ди с т и лли ро ванную во ду до
26
о бъема 10 мл. С о держи мо е про би ро к т щ ат ель но перемеш и ваю т , вли ваю т по 0,5 мл 0,1 н. рас т во ра ни т рат а с еребра в каждую , по с ле ч его вно вь перемеш и ваю т . Ч ерез 10 ми н. наблю даю т по яви вш ую с я о крас ку. В и с пы т уемо м рас т во ре о на до лжна бы т ь не с лабее, ч ем в перво йпро би рке, и не и нт енс и внее, ч ем во вт о ро й. П ри го т о влени е с т андарт но го рас т во ра ри бо флави на: 0,02г (т о ч ная навес ка) ри бо флави на вно с ят в мерную ко лбу вмес т и мо с т ь ю 100 мл, при бавляю т 80-90 мл во ды и нагреваю т до рас т во рени я препарат а, по с ле о хлаждени я о бъем рас т во ра до во дят во до йдо мет ки . 1 мл с т андарт но го рас т во ра с о держи т 0,0002 гри бо флави на. П рилож ение№ 2 П ро пи с ь 13. Раст в о ра ди к аи на 0,5% −10,0 Ме т и ле но в о го сине го 0,015 М етиленов ый синий. К олич еств енноеопределение В т ри про би рки и з о дно т и пно го с т екла и о ди нако во го ди амет ра вно с ят : в первую −2,4 мл, во вт о рую − 3 мл, в т рет ь ю − 3,6 мл с т андарт но го рас т во ра Б , до бавляю т ди с т и лли ро ванно й во ды до о бъема 10 мл, перемеш и ваю т . Зат ем в мерную ко лбу вмес т и мо с т ь ю 100 мл о т мери ваю т 1 мл и с пы т уемо го рас т во ра, до бавляю т ди с т и лли ро ванную во ду до мет ки и перемеш и ваю т (рас т во р В). В ч ет верт ую
про би рку
вли ваю т
3
мл
рас т во ра
В,
при бавляю т
7
мл
ди с т и лли ро ванно йво ды и перемеш и ваю т . Окрас ка и с пы т уемо го рас т во ра до лжна бы т ь не с лабее о крас ки рас т во ра, с о держащ его 2,4 мл, и не и нт енс и внее о крас ки рас т во ра, с о держащ его 3,6 мл рас т во ра с т андарт но го о браз ц а мет и лено во го с и него . П ри го т о влени е с т андарт но го рас т во ра мет и лено во го с и него . 0,1500 гмет и лено во го с и него по мещ аю т в мерную ко лбу вмес т и мо с т ь ю 100 мл, рас т во ряю т в 70−80 мл го ряч ейди с т и лли ро ванно йво ды ; по с ле о хлаждени я о бъем рас т во ра до во дят во до йдо мет ки (рас т во р А). Рас т во р А го ден в т еч ени е 3
27
мес . 1 мл рас т во ра А перено с ят
в мерную ко лбу вмес т и мо с т ь ю 100 мл и
до во дят о бъем рас т во ра во до йдо мет ки (рас т во р Б ). Д икаин. К олич еств енноеопределение В мерную про би рку и ли мерны й ц и ли ндр на 25 мл (ди амет ра ≈2 с м) по мещ аю т 5 мл хло ро фо рма, 1 мл и с с ледуемо го рас т во ра, 1 мл во ды и т и т рую т медленно по каплям 0,02 мо ль /л. рас т во ро м ги дро кс и да нат ри я. Внач але т и т рую т жи дко с т ь при перемеш и вани и без вс т ряхи вани я, а з ат ем вс т ряхи ваю т и о с т авляю т ее по с ле при бавлени я каждо й капли
т и т ро ванно го
рас т во ра. Ти т ро вани е
з аканч и ваю т по с ле и з менени я о крас ки хло ро фо рма о т го лубо йв фи о лет о вую . 1 мл 0,02 мо ль /л . рас т во ра ги дро кс и да нат ри я с о о т вет с т вует 0,006016 гди каи на. П рилож ение№ 3 П ро пи с ь 14. К и сло т ы ф о ли е в о й 0,001 Сахара 0,2 К ислота фолиев ая. К олич еств енноеопределение 0,1 гс мес и по мещ аю т в про би рку, вно с ят 2 мл 1% рас т во ра амми ака (т о ч но при го т о вленно го ), 6 мл во ды и 2 мл 0,1 мо ль /л. рас т во ра ни т рат а с еребра, перемеш и ваю т . Одно временно в две про би рки о т мери ваю т с т андарт ны йрас т во р фо ли ево й ки с ло т ы : в первую − 0,9 мл, во вт о рую − 1,1 мл, при бавляю т с о о т вет с т венно 1,55 и 1,45 мл 1% рас т во ра амми ака, 5,55 и 5,45 мл во ды и по 2 мл 0,1 мо ль /л. рас т во ра ни т рат а с еребра, перемеш и ваю т . Окрас ка и с пы т уемо го рас т во ра до лжна бы т ь и нт енс и внее, ч ем о крас ка рас т во ра в перво йпро би рке, и менее и нт енс и вна, ч ем о крас ка во вт о ро йпро би рке. П ри го т о влени е с т андарт но го рас т во ра фо ли ево йки с ло т ы . 0,0500 г (т о ч ная навес ка) фо ли ево й ки с ло т ы
вно с ят в мерную ко лбу
вмес т и мо с т ь ю 100 мл, до бавляю т 50 мл во ды и 2 мл ко нц ент ри ро ванно го рас т во ра амми ака, до во дят во до й до мет ки и перемеш и ваю т . Рас т во р с ледует храни т ь в
28
про хладно м и
т емно м мес т е. С ро к хранени я − 1 мес . П рилож ение№ 4
П ро пи с ь 15. Раст в о ра ле в о м и це т и на 0,25% и ли 0,3% − 10,0 К и сло т ы бо рно й 0,2 г Лев ом ицетин. О пределениеподлинности К 1 мл фи ль т рат а (рас т во р А) при бавляю т 2−3 капли 0,1 мо ль /л рас т во ра нат ри я ни т ри т а и 0,5 мл по луч енно й с мес и , вли ваю т в 1−2 мл 1% рас т во ра β−нафт о ла, при го т о вленно го на 10% рас т во ре нат ри я ги дро о ки да. П о являет с я крас но е о краш и вани е. Лев ом ицетин. К олич еств енноеопределение. В изуальный м етод В6 кали бро ванны х про би ро ки з о дно т и пно го с т екла и о ди нако во го ди амет ра с при т ерт ы ми про бками вли ваю т 1,8 мл; 2,0 мл; 2,2 мл; 2,4 мл; 2,6 мл с т андарт но го рас т во ра лево ми ц ет и на; в ш ес т ую про би рку – 1,5 мл рас т во ра А*. Во вс е про би рки при бавляю т по 1 мл 0,1% рас т во ра нат ри я ни т ри т а и ч ерез 3 ми нут ы о бъем до во дят во до йдо 8 мл. Зат ем в каждую про би рку при бавляю т по 2 мл 1% рас т во ра β - нафт о ла, при го т о вленно го на 10% рас т во ре нат ри я ги дро кс и да, и перемеш и ваю т . Окрас ку анали з и руемо го рас т во ра с равни ваю т с о крас ко й эт ало нно го рас т во ра, рас с мат ри вая по о с и про би ро к с верху вни з на бело м фо не. С о держани е лево ми ц ет и на (Х ,%) вы ч и с ляю т по фо рмуле:
Х =
а ⋅ 0,00002 ⋅ 25 ⋅1000 5 ⋅1,5
* П ри го т о влени е рас т во ра А. К 5 мл препарат а при бавляю т 1 мл ко нц ент ри ро ванно й хло ро во до ро дно й ки с ло т ы и по с т епенно 0,1 гц и нко во йпы ли , о с т авляю т на 15 ми н. Зат ем рас т во р ко ли ч ес т венно перено с ят в мерную ко лбу вмес т и мо с т ь ю 25 мл. Объем до во дят во до йдо мет ки , перемеш и ваю т и фи ль т рую т . Рас т во р А.
29
П рилож ение№ 5 П ро пи с ь 16. Раст в о р ф ураци ли на 0,02% -10м л Ф урацилин. В изуальная колорим ерия А. В пят ь ко ли бро ванны х про би ро к и з о дно т и пно го с т екла и о ди нако во го ди амет ра с при т ерт ы ми про бками вли ваю т 0,4; 0,45; 0,5; 0,55 и 0,6 мл 0,02% с т андарт но го рас т во ра фурац и ли на, ко т о ры й го т о вят рас т во рени ем в мерно й ко лбе вмес т и мо с т ь ю 100 мл 0,0200 гпрепарат а (0,0002 г/мл)*. Вш ес т ую про би рку вно с ят 0,5 мл анали з и руемо го рас т во ра. Во вс е про би рки вли ваю т во ду до о бъема 8 мл, по 2 мл 0,1 мо ль /л. рас т во ра нат ри я ги дро кс и да и перемеш и ваю т . Ч ерез 20 ми н. с равни ваю т о крас ку анали з и руемо го и эт ало нны х рас т во ро в. С о держани е фурац и ли на в про ц ент ах (С %) вы ч и с ляю т по фо рмуле:
С=
а ⋅ 0,0002 ⋅100 %, 0,5
где а - о бъем с т андарт но го рас т во ра фурац и ли на в рас т во ре, с хо дно м по о крас ке с анали з и руемы м (в мл). Вы ш еуказ анны й рас т во р мо жно анали з и ро ват ь ко ло ри мет ри ч ес ки бо лее упро щ енны м с по с о бо м. Б . В т ри (*) про би рки и з о дно т и пно го с т екла и о ди нако во го ди амет ра о т мери ваю т пи пет ко йс ц ено йделени я 0,01 мл: в первую - 0,45 мл с т андарт но го 0,02% рас т во ра фурац и ли на, во вт о рую - 0,55 мл, в т рет ь ю - 0,5 мл и с с ледуемо го 0,02% рас т во ра фурац и ли на. Во вс е про би рки о т мери ваю т ди с т и лли ро ванную во ду до о бъема 5 мл (в первую - 4,55 мл, во вт о рую - 4,45 мл, в т рет ь ю - 4,5 мл). С о держи мо е про би ро кт щ ат ель но перемеш и ваю т и вли ваю т по 0,5 мл 0,1 мо ль /л. рас т во ра нат ри я ги дро кс и да в каждую , вно вь перемеш и ваю т и ч ерез 10 ми н. наблю даю т по яви вш ую с я о крас ку. В и с с ледуемо м рас т во ре о на до лжна бы т ь не
30
с лабее, ч ем в перво й про би рке, и не и нт енс и внее, ч ем во вт о ро й. П рилож ение№ 6 П ро пи с ь 25. Раст в о р ст ре пт о ци да раст в о ри м о го 0,8%; 1%; 2%; 5% и ли 10% Стрептоцид. О пределениеподлинности 1.
К 2-3
каплям
рас т во ра
при бавляю т
5-6
капель
раз веденно й
хло ро во до ро дно йки с ло т ы и нагреваю т до ки пени я. Вы деляю т с я фо рмаль деги д и с ерни с т ы йанги дри д, о бнаружи ваемы е по з апаху. П о с ле о хлаждени я до бавляю т 56 капель во ды , 2-3 капли 0,1 мо ль /л рас т во ра нат ри я ни т рат а и 0,1-0,3 мл по луч енно йс мес и и вли ваю т в 1-2 мл щ ело ч но го рас т во ра β-нафт о ла. П о являет с я ви ш нево -крас но е о краш и вани е. 2. К 2-3 каплям рас т во ра при бавляю т 4-5 капель реакт и ва Н ес с лера. П о с т епенно о браз ует с я с еры йо с адо к. 3. К 3-5 каплям рас т во ра при бавляю т по 2-3 капли рас т во ро в переки с и во до ро да и
хло ри да желез а(111). П о являет с я крас но е о краш и вани е, бы с т ро
перехо дящ ее в буро е. 4. Ч ас т ь рас т во ра на графи т о во йпало ч ке вно с ят в бес ц вет но е пламя. П ламя о краш и вает с я в желт ы йц вет . Стрептоцид. К олич еств енноеопределение К1 мл 0,8%, 1% и 5% и ли 0,5 мл 2% и ли 10% рас т во ра препарат а при бавляю т 1 мл рас т во ра нат ри я ги дро кс и да и вы пари ваю т на во дяно йбане. Кс ухо му о с т ат ку до бавляю т 10 мл во ды , 5 мл раз веденно йхло ро во до ро дно йки с ло т ы и ки пят ят 5 ми н. П о с ле о хлаждени я до бавляю т 5 мл во ды , 0,2 г кали я бро ми да, 2 капли рас т во ра т ро пео ли на 00, 1 каплю рас т во ра мет и лено во го с и него и при 18 - 20 ˚ С т и т рую т 0,02 мо ль /л (0,8%;1%;2%) и ли 0,1 мо ль /л (5% и 10%) рас т во ро м ни т рат а нат ри я, до бавляю т его в нач але по 0,2 - 0,3 мл ч ерез 1 ми н, а в ко нц е т и т ро вани я (з а 0,1 - 0,2 мл до т о ч ки экви валент но с т и ) по 1 – 2 капли ч ерез 1 ми н. до перехо да крас но -фи о лет о во йо крас ки в го лубую .
31
П ри
т и т ро вани и
0,02
мо ль /л рас т во ро м нат ри я ни т ри т а параллель но
про во дят ко нт ро ль ны йо пы т . 1 мл 0,02 мо ль /л рас т во ра нат ри я ни т ри т а с о о т вет с т вует 0,005766 г,а 0,1 мо ль /л - 0,02883 гс т репт о ц и да рас т во ри мо го . П рилож ение№ 7 П ро пи с ь 27 . Эри т ро м и ци на 0,02 г Глю к о зы (и ли сахара) 0,2 г Э ритром ицин. О пределениеподлинности К 0,02 г по ро ш ка при бавляю т
1 мл ац ет о на и 1 мл ко нц ент ри ро ванно й
хло ро во до ро дно й ки с ло т ы . П о являет с я о ранжево е о краш и вани е, по с т епенно перехо дящ ее в т емно -крас но е. Зат ем до бавляю т 2 мл хло ро фо рма и вз балт ы ваю т . Х ло ро фо рмны йс ло йо краш и вает с я в фи о лет о вы йц вет . Глю ко з а. Определени е по дли нно с т и . К 0,01г. по ро ш ка при бавляю т 0,5 мл во ды , 1 - 2 мл реакт и ва Ф ели нга и нагреваю т до ки пени я. Образ ует с я о с адо к ки рпи ч но -крас но го ц вет а. Э ритром ицин. К олич еств енноеопределение. А цидим етрия Рас т во ряю т 0,15 г по ро ш ка в 2 мл 96% эт ано ла, нейт рали з о ванно го по мет и ло во му крас но му, при бавляю т 10 мл с вежепро ки пяч енно йо хлажденно йво ды и
т и т рую т
0,02 мо ль /л рас т во ро м хло ро во до ро дно й ки с ло т ы
до
ро з о во го
о краш и вани я. 1 мл 0,02 мо ль /л рас т во ра хло ро во до ро дно йки с ло т ы с о о т вет с т вует 0,01468 г эри т ро ми ц и на. Э ритром ицин. К олич еств енноеопределение. Ф отоколорим етрия Око ло
0,7 г по ро ш ка (т о ч ная навес ка) по мещ аю т
в мерную
ко лбу
вмес т и мо с т ь ю 100 мл, при бавляю т 10 мл 95% с пи рт а эт и ло во го , перемеш и ваю т 12 ми н., до во дят о бъем во до йдо мет ки . 2 мл рас т во ра перено с ят в мерную ко лбу вмес т и мо с т ь ю 25 мл, при бавляю т 10 мл 9 мо ль /л рас т во ра с ерно й ки с ло т ы и
32
нагреваю т
на во дяно й бане 5 ми н. Рас т во р бы с т ро о хлаждаю т и о бъем
до во дят т о йже с ерно йки с ло т о йдо мет ки . И з меряю т о пт и ч ес кую пло т но с т ь (D1) о краш енно го рас т во ра при дли не во лны о ко ло 410 нм в кю вет е с т о лщ и но йс ло я 1с м о т но с и т ель но рас т во ра с равнени я. П араллель но и з меряю т о пт и ч ес кую пло т но с т ь рабо ч его с т андарт но го о браз ц а (РС О) эри т ро ми ц и на, 1 мл ко т о ро го с о держи т 0.00008 гэри т ро ми ц и на. П ри го т о влени е с т андарт но го рас т во ра эри т ро ми ц и на. Око ло 0,1 г(т о ч ная навес ка) эри т ро ми ц и на рас т во ряю т в 10 мл 95% с пи рт а эт и ло во го в мерно йко лбе вмес т и мо с т ь ю 100 мл. С о держи мо е до во дят во до йдо мет ки , перемеш и ваю т (0,1% рас т во р). 2мл 0,1% рас т во ра перено с ят в мерную ко лбу вмес т и мо с т ь ю 25 мл, при бавляю т 10мл 9 мо ль /л рас т во ра с ерно йки с ло т ы и нагреваю т на во дяно йбане 5 ми н., рас т во р о хлаждаю т и до во дят т о йже с ерно йки с ло т о йдо мет ки . И з меряю т о пт и ч ес кую пло т но с т ь (D2) о краш енно го рас т во ра при дли не во лны о ко ло 410 нм в кю вет е с т о лщ и но йс ло я в 1 с м о т но с и т ель но рас т во ра с равнени я. П ри го т о влени е рас т во ра с равнени я: в мерную ко лбу вмес т и мо с т ь ю 25 мл о т мери ваю т 0,2 мл 95% с пи рт а эт и ло во го , 1,8 мл во ды и до во дят с о держи мо е ко лбы 9 мо ль /л рас т во ро м с ерно йки с ло т ы до мет ки , перемеш и ваю т . С о держани е эри т ро ми ц и на (Х ) в граммах вы ч и с ляю т по фо рмуле:
X=
D1 ⋅ 0,002 ⋅ 100 ⋅ P , D2 ⋅ 2 ⋅ a
где: Р- с редняя мас с а по ро ш ка, г; а - мас с а навес ки по ро ш ка, вз ят ая для анали з а, г. D 1, D2 – о пт и ч ес кая пло т но с т ь с о о т вет с т венно и с пы т уемо го и с т андарт но го рат с т во ро в. Глю коза. К олич еств енноеопределение К 0,1 г по ро ш ка при бавляю т 1 - 1,5 мл во ды и вс т ряхи ваю т 1 ми н. Зат ем о бъем рас т во ра до во дят во до йдо 2 мл, перемеш и ваю т , фи ль т рую т ч ерез с ухо й фи ль т р и о пределяю т по каз ат ели прело млени я фи ль т рат а (n) и во ды (n0) при 200С .
33
С о держани е
глю ко з ы
Х =
(Х )
в граммах вы ч и с ляю т по фо рмуле:
(n − n0 ) ⋅ P ⋅ 2 ⋅ 1,11 , где 0,1 ⋅ 0,00142 ⋅ 100
Р - с редняя мас с а по ро ш ка, г; 0,00142-факт о р по каз ат еля прело млени я рас т во ра без во дно й глю ко з ы ; 1,11 - ко эффи ц и ент перес ч ет а на во дную глю ко з у при с о держани и 10% влаги в препарат е. П рилож ение№ 8 Ме т о ди к а анали за ле к арст в е нно й ф о рм ы : Ане ст е зи на 0,3 Эк ст рак т а к расав к и сухо го 0,03 А нестезин. К олич еств енноеопределение 0,1 г по ро ш ка рас т во ряю т в 10 мл раз веденно йхло ро во до ро дно йки с ло т ы , до бавляю т 1 гбро ми да кали я и т и т рую т 0,1 мо ль /л рас т во ро м ни т ри т а нат ри я до по явлени я с и него о краш и вани я (и нди кат о р-2 капли рас т во ра т ро пео ли на 00 и 1 капля рас т во ра мет и лено во го с и него ). А лкалоиды сухог о экстракта красав ки. К олич еств енноеопределение Око ло 0,33 г по ро ш ка по мещ аю т в дели т ель ную во ро нку, при бавляю т 5 капель ко нц ент ри ро ванно го рас т во ра ги дро кс и да аммо ни я, 10 мл хло ро фо рма, вс т ряхи ваю т 2 ми нут ы . Х ло ро фо рмны е и з влеч ени я фи ль т рую т
ч ерез бумажны й фи ль т р с 1 г
без во дно го с уль фат а нат ри я в вы пари т ель ную ч аш ку. Рас т во р в дели т ель но й во ро нке и фи ль т р про мы ваю т 10 мл хло ро фо рма. Х ло ро фо рмны е и з влеч ени я о бъеди няю т
и вы пари ваю т до с уха на ки пящ ей во дяно й бане. Ос т ат о к в
вы пари т ель но йч аш ке рас т во ряю т в 20 мл хло ро фо рма, перено с ят в дели т ель ную во ро нку, при бавляю т 3,5 мл ги дро фт алат но го буферно го рас т во ра с рН = 5,4; 1,5
34
мл рас т во ра мет и ло во го о ранжево го и
вс т ряхи ваю т
4
ми н.
Опт и ч ес кую
пло т но с т ь по луч енно го и з влеч ени я (А) и з меряю т на фо т о элект ро ко ло ри мет ре при дли не во лны о ко ло 434 нм, в кю вет е с т о лщ и но йс ло я 1с м. Рас т во р с равнени я хло ро фо рм. П араллель но и з меряю т о пт и ч ес кую пло т но с т ь эт ало нно го рас т во ра ат ро пи на о с но вани я (Ас т ), для ч его 4 мл с т андарт но го рас т во ра ат ро пи на о с но вани я по мещ аю т
в дели т ель ную
во ро нку, при бавляю т
3,5 мл ги дро фт алат но го
буферно го рас т во ра с рН = 5,4; 1,5 мл рас т во ра мет и ло во го о ранжево го , 15 мл хло ро фо рма. 1 мл с т андарт но го рас т во ра с о держи т 0,00005 го с но вани я ат ро пи на (С с т ). С о держани е алкало и до в крас авки в граммах (Х ) в лекарс т венно й фо рме вы ч и с ляю т по фо рмуле:
X=
A ⋅ CCT ⋅ P , ACT ⋅ a ⋅ K ⋅ 250
где К= 1,17, ко эффи ц и ент перес ч ет а на ат ро пи н о с но вани е; А - о пт и ч ес кая пло т но с т ь и с пы т уемо го рас т во ра экс т ракт а; Ас т - о пт и ч ес кая пло т но с т ь с т андарт но го рас т во ра; а - навес ка (г) лекарс т венно йфо рмы , вз ят о йдля при го т о влени я рас т во ра А; Р - о бщ ая мас с а лекарс т венно йфо рмы . С о держани е алкало и до в в лекарс т венно й фо рме до лжно бы т ь в пределах 0,00019г-0,00026 г. П рилож ение9 Ме т о ди к а анали за ле к арст в е нно й ф о рм ы : Фе ни лсали ци лат а 0,3 П апав е ри на ги дро хло ри да 0,03 Эк ст рак т а к расав к и сухо го 0,03. П апав ерина г идрохлорид. К олич еств енноеопределение
35
Око ло 0,36 г по ро ш ка по мещ аю т в дели т ель ную во ро нку, до бавляю т 5 мл хло ро фо рма. Вс т ряхи ваю т
2 ми н., до бавляю т
2 мл во ды . Х ло ро фо рмны е
и з влеч ени я перено с ят в ко лбу, с о держи мо е во ро нки про мы ваю т 5 мл хло ро фо рма. Х ло ро фо рмны е и з влеч ени я о бъеди няю т и упари ваю т на ки пящ ейво дяно йбане. Ос т ат о к в ко лбе рас т во ряю т
в 10
мл
с пи рт а,
нейт рали з о ванно го
по
фено лфт алеи ну, т и т рую т 0,02 мо ль /л рас т во ро м ги дро кс и да нат ри я до ро з о во го о краш и вани я. 1 мл 0,02 мо ль /л рас т во ра ги дро кс и да нат ри я с о о т вет с т вует 0,007518 гпапавери на ги дро хло ри да. Ф енилсалицилат. К олич еств енноеопределение В ко лбу по с ле о пределени я папавери на ги дро хло ри да при бавляю т 20 мл 0,1 мо ль /л рас т во ра ги дро кс и да нат ри я, при с о еди няю т о брат ны й хо ло ди ль ни к и нагреваю т на ки пящ ей во дяно й бане 40-60 ми н. до и с ч ез но вени я мас ляни с т ы х капель . П о о хлаждени и и з бы т о к 0,1 мо ль /л рас т во ра ги дро кс и да нат ри я т и т рую т 0,1 мо ль /л рас т во ро м хло ро во до ро дно йки с ло т ы (и нди кат о р - 3 капли рас т во ра бро мкрез о ло во го пурпурно го ) до желт о го о краш и вани я. 1 мл 0,1 мо ль /л рас т во ра ги дро кс и да нат ри я с о о т вет с т вует 0,02142 гфени лс али ц и лат а. О пределение тропанов ых алкалоидов в с ухо м экс т ракт е крас авки . К во дно му
рас т во ру
ко нц ент ри ро ванно го
в
дели т ель но й
во ро нке
при бавляю т
рас т во ра ги дро кс и да аммо ни я,
10
мл
5
капель
хло ро фо рма,
вс т ряхи ваю т 2 ми н. Далее по с т упаю т , как о пи с ано в преды дущ ей мет о ди ке (П ри ло жени е 8), нач и ная с о с ло в: хло ро фо рмно е и з влеч ени е фи ль т рую т ч ерез бумажны йфи ль т р. С о держани е алкало и до в крас авки в граммах (Х ) рас с ч и т ы ваю по фо рмуле:
X =
A ⋅ CCT ⋅ P ACT ⋅ a ⋅ K ⋅ 250
9.2. Ф О Т О К О ЛО РИ М Е Т Р, У СТ РО Й СТ В О , Т Е Х Н И К А В ЫП О ЛН Е Н И Я И ЗМ Е РЕ Н И Й
36
Ф о т о мет р (ри с . 1) вы по лнен в ви де о дно го
бло ка.
На
мет алли ч ес ко м
о с но вани и 3 з акреплены уз лы фо т о мет ра, ко т о ры е з акры ваю т с я ко жухо м 1. Кю вет но е о т делени е з акры вает с я с ъемно йкры ш ко й5.
В фо т о мет р вхо дят
фо т о мет ри ч ес ки й бло к 2 (ри с .), бло к пи т ани я 3,
ми кро про ц ес с о рная с и с т ема 4. Н а бо ко во йс т енке фо т о мет ра (ри с . 5) рас по ло жена о с ь рез и с т о ра 1 (УС Т. 0) и т умблер 2 (С ЕТЬ). Н а з аднейс т енке о с но вани я фо т о мет ра (ри с . 3) рас по ло жена ро з ет ка 5 для по дклю ч ени я кфо т о мет ру т ермо печ ат аю щ его ус т ро йс т ва т и па УТП -2.
1. Б лок фотом етрич еский В фо т о мет ри ч ес ки й бло к вхо дят : о с вет и т ель , мо но хро мат о р, кю вет но е о т делени е,
кю вет о держат ель ,
фо т о мет ррч ес ко е
механи з ма о с вет и т еля о бес печ и вает
ус т ро йс т во .
перемещ ени е лампы
Ко нкуренц и я
в т рех вз аи мно
перпенди кулярны х направлени ях. М о но хро мат о р 1 (с м. ри с . 2) с лужи т для по луч ени я и з луч ени я з аданно го с пект раль но го с о с т ава и с о с т о и т и з ко рпус а, уз ла вхо дно й щ ели , с фери ч ес ко го з еркала, ди фракц и о нно йреш ет ки ч ерез с и нус но го механи з ма. Руч ка 2 (с м. ри с . 1) с лужи т для по во ро т а ди фракц и о нно й реш ет ки ч ерез с и нус ны ймехани з м и ус т ано вки т ребуемо йдли ны во лны в нано мет рах. Кю вет но е о т делени е 6 (с м. ри с . 2) предс т авляет с о бо й ко рпус , ко т о ры й с по мо щ ь ю бо лт о в крепи т с я к ко рпус у мо но хро мат о ра. В право й ч ас т и эт о го ко рпус а рас по ло жен карман 5 с кры ш ко й, в ко т о ро м раз мещ ено фо т о мет ри ч ес ко е ус т ро йс т во . В фо т о мет ри ч ес ко е ус т ро йс т во
вхо дят
фо т о ди о д и
ус и ли т ель
37
по с т о янно го
т о ка.
Ус и ли т ель
по с т о янно го
т о ка ус т анавли вает с я в
фо т о мет р ч ерез раз ъем. Для ко нт ро ля вы хо дно го напряжени я УП Т на печ ат но йплат е, нахо дящ ейс я у бо ко во йс т енки фо т о мет ра, и меет с я 2 гнез да, з акры т ы х ко жухо м 1 (ри с . 3). Н а эт о йже плат е нахо ди т с я рез и с т о р 1 (ри с . 3). В кю вет о держат ель ус т анавли ваю т кю вет ы с рас т во ри т елем (ко нт ро ль ны м рас т во ро м) и и с с ледуемы м рас т во ро м и по мещ аю т и х в кю вет но е о т делени е 6 (с м. ри с . 2). П О РЯ Д О К РА Б О Т Ы 1. И з мерени е ко эффи ц и ент а про пус кани я и ли о пт и ч ес ко йпло т но с т и 1.1. Ус т ано ви т ь в кю вет но е о т делени е кю вет ы
с рас т во ри т елем и ли
ко нт ро ль ны м рас т во ро м, по о т но ш ени ю к ко т о ро му про и з во ди т с я и з мерени е, и и с с ледуемы м рас т во ро м. Кю вет у с рас т во ри т елем и ли ко нт ро ль ны м рас т во ро м ус т ано ви т ь в даль нее гнез до
кю вет о держат еля, а кю вет у с и с с ледуемы м
рас т во ро м — в бли жнее гнез до кю вет о держат еля. В с вет о во йпуч о кус т ано ви т ь кю вет у с рас т во ри т елем (руко ят ка 4 (с м. ри с . 1) — влево до упо ра). Ес ли и з мерени е про во ди т с я о т но с и т ель но во з духа, напри мер, для о браз ц а и з с т екла и ли друго го про з рач но го мат ери ала, т о в эт о м с луч ае даль нее гнез до кю вет о держат еля до лжно бы т ь с во бо дны м. 1.2. Ус т ано ви т ь руч ко й2 (с м. ри с . 1) дли ну во лны , на ко т о ро йпро во дят с я и з мерени я рас т во ра. Дли на во лны вы с вет и т с я на верхнем ц и фро во м т абло . П ри меч ани е. П ри рабо т е на дли не во лны 400 нм во з мо жна нес т аби ль ная рабо т а фо т о мет ра. Во и з бежани е эт о го ус т анавли вайт е дли ну во лны (400±2) нм, где с т аби ль но с т ь рабо т ы Вас ус т ро и т . 1.3. П ри з акры т о йкры ш ке кю вет но го о т делени я нажат ь клави ш у «Г». Н а ни жнем ц и фро во м т абло с лева о т ми гаю щ ей з апят о й вы с вет и т с я с и мво л «Г». Н ажат ь клави ш у «П » и ли «Е». С лева о т
ми гаю щ ей з апят о й вы с вет и т с я
38
с о о т вет с т венно с и мво л «П » и ли «Е», а с права
от
ми гаю щ ей з апят о й —
с о о т вет с т венно з нач ени я «100,0±0,2» и ли «0,000 ±0,002», о з нач аю щ и е, ч т о нач аль ны йо т с ч ет про пус кани я (100,0%) и ли о пт и ч ес ко йпло т но с т и (0,000) ус т ано ви лс я на фо т о мет ре прави ль но . Ес ли
о т с ч ет ы
«100,0±0,2»
и ли
«0,000±0,002»
ус т ано ви ли с ь
с
бо ль ш и м
о т кло нени ем, нажат ь на клави ш и «Г», «П » и ли «Е» по вт о рно , с о блю дая небо ль ш ую пауз у (3— 5 с ). От кры т ь кры ш ку кю вет но го о т делени я и нажат ь клави ш у Н УЛ Ь, з акры т ь кры ш ку, нажат ь клави ш у П и ли Е. П р и м еч ан и е. Для про верки прави ль но с т и уч ет а «нуля» о т кро йт е кры ш ку кю вет но го о т делени я, при эт о м о т с ч ет на т абло до лжен бы т ь (0,00±0,02). 1.4. Зат ем руко ят ку 4 (с м ри с . 10) ус т ано ви т ь вправо до упо ра, при эт о м в с вет о во йпуч о к вво ди т с я кю вет а с и с с ледуемы м рас т во ро м. От с ч ет на с вет о во м т абло с права о т ми гаю щ ей з апят о й с о о т вет с т вует ко эффи ц и ент у про пус кани я и ли о пт и ч ес ко йпло т но с т и и с с ледуемо го рас т во ра. 1.5. П о вт о ри т ь о перац и и по пп. 1.1 —
1.4 т ри раз а, вы ч и с ли т ь с реднее
ари фмет и ч ес ко е з нач ени е и з меряемо йвели ч и ны . 1.6. Для по с т ро ени я с пект раль но й кри во й ко эффи ц и ент а про пус кани я и ли о пт и ч ес ко йпло т но с т и о браз ц а и з мерени я про вес т и по мет о ди ке пп. 1.1 — 1.4. 1.7. П о с т ро и т ь с пект раль ную кри вую с вет о про пус кани я и ли о пт и ч ес ко й пло т но с т и и с с ледуемо го рас т во ра, о т клады вая по го ри з о нт аль но йо с и дли ны во лн в нано мет рах, а по верт и каль но й— с вет о про пус кани е и ли о пт и ч ес кую пло т но с т ь . 2. И з мерени е ко нц ент рац и и вещ ес т ва в рас т во ре Для и з мерени я ко нц ент рац и и вещ ес т ва в рас т во ре нео бхо ди мо предвари т ель но вы по лни т ь ряд по дго т о ви т ель ны х о перац и йв с ледую щ ейпо с ледо ват ель но с т и : вы бо р дли ны во лны ; вы бо р кю вет ы ; по с т ро ени е градуи ро во ч но го графи ка для данно го вещ ес т ва и о пределени е ко эффи ц и ент а факт о ри з ац и и F;
39
введени е ко эффи ц и ент а F в памят ь
вы ч и с ли т ель но го бло ка;
и з мерени е ко нц ент рац и и вещ ес т ва. 2.1. Вы бо р дли ны во лны Для до с т и жени я наи мень ш ей по греш но с т и в о пределени и ко нц ент рац и и с ледует
прави ль но
вы брат ь дли ну во лны , на ко т о ро й будет
вы по лнят ь с я
и з мерени е. Для эт о го по с пект раль но йкри во йрас т во ра, с нят о йпо мет о ди ке пп. 1.1.— 1.7, вы брат ь т ако йуч ас т о к, на ко т о ро м вы по лняю т с я с ледую щ и е ус ло ви я: о пт и ч ес кая пло т но с т ь и меет макс и маль ную вели ч и ну; хо д кри во йпри мерно параллелен го ри з о нт аль но йо с и , т . е. о пт и ч ес кая пло т но с т ь мало з ави с и т о т дли ны во лны . Дли на во лны , с о о т вет с т вую щ ая эт о му уч ас т ку, вы би рает с я для и з мерени я. Ес ли для неко т о ры х рас т во ро в вт о ро е ус ло ви е не вы по лняет с я, т о рабо ч ая дли на во лны вы би рает с я по перво му ус ло ви ю . 2.2. Вы бо р кю вет ы Как указ ы вало с ь вы ш е, абс о лю т ная по греш но с т ь и з мерени я ко эффи ц и ент а про пус кани я не превы ш ает
0,5%. От но с и т ель ная по греш но с т ь
и з мерени я
о пт и ч ес ко й пло т но с т и рас т во ра будет раз ли ч но й и до с т и гает ми ни мума при з нач ени и
о пт и ч ес ко й пло т но с т и
0,4. П о эт о му при
рабо т е на фо т о мет ре
реко мендует с я пут ем с о о т вет с т вую щ его вы бо ра дли ны кю вет рабо т ат ь вбли з и указ анно го з нач ени я о пт и ч ес ко йпло т но с т и , напри мер, в пределах о т 0,3 до 0,6. 2.3. П о с т ро ени е градуи ро во ч но го графи ка и о пределени е ко эффи ц и ент а факт о ри з ац и и П о с т ро ени е градуи ро во ч но го
графи ка про во ди т ь
с ледую щ и м
о браз о м.
П ри го т о ви т ь ряд рас т во ро в данно го вещ ес т ва с и з вес т ны ми ко нц ент рац и ями , о хват ы ваю щ и ми о блас т ь во з мо жны х и з менени йко нц ент рац и йэт о го вещ ес т ва в и с с ледуемо м рас т во ре.
40
И з мери т ь
о пт и ч ес ки е
пло т но с т и
вс ех
градуи ро во ч ны й графи к, о т клады вая
по
рас т во ро в
и
по с т ро и т ь
го ри з о нт аль но й о с и
и з вес т ны е
ко нц ент рац и и , а по верт и каль но й— с о о т вет с т вую щ и е и м з нач ени я о пт и ч ес ко й пло т но с т и . С ледует убеди т ь с я в т о м, ч т о з ави с и мо с т ь ко нц ент рац и и о т о пт и ч ес ко й пло т но с т и — ли нейная, т . е. вы ражает с я на графи ке прямо йли ни ей. Рас с ч и т ат ь по графи ку ко эффи ц и ент факт о ри з ац и и F, для эт о го по графи ку ко нц ент рац и й с ни маю т
з нач ени е
С
для
с редней ч ас т и
графи ка
и
с о о т вет с т вую щ ую эт о йко нц ент рац и и о пт и ч ес кую пло т но с т ь D: F=C ⁄ D Ес ли при по с т ро ени и градуи ро во ч но го графи ка будет ус т ано влено , ч т о з ави с и мо с т ь между о пт и ч ес ко й пло т но с т ь ю и ко нц ент рац и ей не ли нейная, ко эффи ц и ент
факт о ри з ац и и
F
о пределят ь
не
т ребует с я.
Определени е
ко нц ент рац и и в эт о м с луч ае про во ди т ь по градуи ро во ч но му графи ку. 2.4. Введени е ко эффи ц и ент а факт о ри з ац и и F в памят ь вы ч и с ли т ель но го бло ка. Ввес т и в памят ь вы ч и с ли т ель но го бло ка ко эффи ц и ент F. Для эт о го нажат ь клави ш у «F», на ц и фро во м т абло с лева о т ми гаю щ ейз апят о йвы с вет и т с я с и мво л «F». Н абрат ь с по мо щ ь ю клави ат уры з нач ени я ко эффи ц и ент а F. Н а ц и фро во м т абло
с права
от
ми гаю щ ей з апят о й вы с вет и т с я
набранно е
з нач ени е
ко эффи ц и ент а. Ф о т о мет р для и з мерени я ко нц ент рац и и по дго т о влен. П р и м еч ан и е. П ри по вт о рно м вы ведени и ко эффи ц и ент а факт о ри з ац и и на ц и фро во м т абло
во з мо жно
умень ш ени е по с ледней з нач ащ ей ц и фры
на
еди ни ц у. 2.5. И з мерени е ко нц ент рац и и вещ ес т ва в рас т во ре. П ро вес т и о перац и ю по пункт ам 1.1.-1.4.
П ри эт о м и с с ледуемы й рас т во р нали т ь в кю вет ы т о й же
рабо ч ейдли ны , с ко т о ро йпро во ди лас ь градуи ро вка и ус т ано ви т ь дли ну во лны , вы бранную по пункт у 2.1.
41
Н ажат ь клави ш у «С ». От с ч ет на ц и фро во м т абло с права о т ми гаю щ ей з апят о йс о о т вет с т вует з нач ени ю ко нц ент рац и и и с с ледуемо го рас т во ра. 3. Определени е с ко ро с т и и з менени я о пт и ч ес ко йпло т но с т и рас т во ра. Для о пределени я с о с т о яни я реакц и и , про т екаю щ ей в рас т во ре, бы вает нео бхо ди мо о пределят ь с ко ро с т ь и з менени я о пт и ч ес ко йпло т но с т и з а како й-т о з аданны йпро межут о квремени t. 3.1.
П ро вес т и о перац и и по пункт ам 1.1.-1.4. при эт о м по пункт ам 1.2.
ус т ано ви т ь т ребуемую дли ну во лны . 3.2.
Н ажат ь на клави ш у «А». Н а ц и фро во м т абло с лева о т ми гаю щ ей
з апят о йвы с вет и т с я с и мво л «А». 3.3. Ввес т и в памят ь время t, з а ко т о ро е нео бхо ди мо о предели т ь с ко ро с т ь А и з менени я о пт и ч ес ко йпло т но с т и (время вво ди т с я в ми нут ах и мо жет при ни мат ь з нач ени я ц елы х ч и с ел о т 1 до 9). 3.4. Ч ерез время t на ц и фро во м т абло с права о т ми гаю щ ей з апят о й вы с вет и т с я з нач ени е с ко ро с т и и з менени я о пт и ч ес ко йпло т но с т и . 3.5. Ес ли т ребует с я о предели т ь с ко ро с т ь и з менени я о пт и ч ес ко йпло т но с т и т о го же рас т во ра в с ледую щ и йпро межут о к времени t, ус т ано вленны йв пункт е 3.3., – нажат ь вно вь клави ш у «А».
42
Ри с .1. Общ и йви д фо т о мет ра
Ри с . 2. Ви д фо т о мет ра без ко жуха
Ри с .3. Ви д фо т о мет ра с з ади
10. О Т В Е Т Ы К Т Е СТ А М
43
1) 1-Б ;2-Е; 3-С ; 4-А,Д; 5-В. 2) 1-В; 2-Г; 3-А; 4-Б . 3) 1-Б ; 2-В; 3-Г; 4-А. 4) 1-Б ; 2-А; 3-В; 4-Г. 5) 1-Г; 2-В; 3-А; 4-Б . 6) А-г; Б -а 7) 1-В; 2-А; 3,4-Д; 5-Б ; 6-Г.
С о с т ави т ель Н ес т еро ва Тамара Алекс андро вна Редакт о р О. А. Ти хо ми ро ва
